Принципи и методи на квантитативна анализа со течна хроматографија

Механизмот на сепарација на течната хроматографија се заснова на разликата во афинитетот на компонентите во смесата за двете фази.

Според различните стационарни фази, течната хроматографија се дели на течно-цврста хроматографија, течно-течна хроматографија и сврзана фазна хроматографија.Најшироко користени се течно-цврста хроматографија со силика гел како филер и сврзана фаза хроматографија со микросилициум како матрица.

Според формата на стационарна фаза, течната хроматографија може да се подели на колона хроматографија, хартиена хроматографија и тенкослојна хроматографија.Според капацитетот на адсорпција, може да се подели на адсорпциона хроматографија, партициона хроматографија, хроматографија за размена на јони и хроматографија со гел-пропустливост.

Во последниве години, систем за проток на течност под висок притисок е додаден на системот за хроматографија на течна колона за да се направи мобилната фаза да тече брзо под висок притисок за да се подобри ефектот на раздвојување, така што е висока ефикасна (исто така позната како висок притисок) течна хроматографија се појави.

ДЕЛ
01 Принцип на квантитативна анализа на течна хроматографија

За да се квантифицираат врз основа на квалитативни, потребни се чисти супстанции како стандарди;

Квантификацијата со течна хроматографија е релативно квантитативен метод: односно, количината на аналитот во смесата се проценува од позната количина на чист стандарден примерок

ДЕЛ
02 Основа за квантификација со течна хроматографија

Количината на измерената компонента (W) е пропорционална на вредноста на одговорот (A) (висина на врвот или површина на врвот), W=f×A.

Фактор на квантитативна корекција (f): Тоа е константа на пропорционалност на формулата за квантитативна пресметка, а нејзиното физичко значење е количината на измерената компонента претставена со единечната вредност на одговорот (површина на врвот).

Факторот на квантитативна корекција може да се добие од познатата количина на стандардна мостра и неговата вредност на одговорот.

Измерете ја вредноста на одговорот на непознатата компонента, а количината на компонентата може да се добие со факторот на квантитативна корекција.

ДЕЛ
03 Заеднички термини во квантитативната анализа

Примерок (примерок): раствор кој содржи аналит за хроматографска анализа.Поделени на стандардни и непознати примероци.

Стандард: Чист производ со позната концентрација.Непознат примерок (непознат): Смесата чија концентрација треба да се тестира.

Тежина на примерокот: Оригинално мерење на примерокот што треба да се тестира.

Разредување: Фактор на разредување на непознатиот примерок.

Компонента: хроматографскиот врв што треба квантитативно да се анализира, односно аналитот чија содржина е непозната.

Количина на компонента (количина): содржината (или концентрацијата) на супстанцијата што треба да се тестира.

Целосност: пресметковен процес на мерење на површината на врвот на хроматографскиот врв со компјутер.

Крива на калибрација: Линеарна крива на содржината на компонентата наспроти вредноста на одговорот, утврдена од позната количина на стандардна супстанција, која се користи за одредување на непознатата содржина на аналитот.

ДЕЛ
04 Квантитативна анализа на течна хроматографија

1. Изберете хроматографски метод погоден за квантитативна анализа:

l Потврдете го врвот на откриената компонента и постигнете резолуција (R) поголема од 1,5

l Одредете ја конзистентноста (чистотата) на хроматографските врвови на тестираните компоненти

l Да се ​​определи границата за откривање и квантификацијата на методот;чувствителност и линеарен опсег

2. Воспоставете крива на калибрација со стандардни примероци со различни концентрации

3. Проверете ја точноста и прецизноста на квантитативните методи

4. Користете го соодветниот софтвер за управување со хроматографија за да имплементирате собирање примероци, обработка на податоци и извештај за резултатите

ДЕЛ
05 Идентификација на квантитативни врвови (квалитативни)

Квалитативно идентификувајте го секој хроматографски врв што треба да се измери

Прво, користете го стандардниот примерок за да го одредите времето на задржување (Rt) на хроматографскиот врв што треба да се измери.Со споредување на времето на задржување, пронајдете ја компонентата што одговара на секој хроматографски врв во непознатиот примерок.Хроматографскиот квалитативен метод е да се спореди времето на задржување со стандардниот примерок.Критериумот Недоволендополнителна потврда (квалитативна)

1. Стандарден метод на додавање

2. Во исто време користете други методи: други хроматографски методи (променете го механизмот, како што се: користење на различни хроматографски колони), други детектори (PDA: споредба на спектарот, пребарување на библиотека на спектар; MS: анализа на масовен спектар, пребарување на библиотека со спектар)

3. Други инструменти и методи

ДЕЛ
06 Потврда за квантитативна врвна конзистентност

Потврдете ја хроматографската врвна конзистентност (чистота)

Осигурете се дека има само една измерена компонента под секој хроматографски врв

Проверете дали има интерференција од супстанции кои се испуштаат заедно (нечистотии)

Методи за потврдување на хроматографската врвна конзистентност (чистота)

Споредба на спектрограми со детектори со фотодиодни матрици (PDA).

Идентификација на врвна чистота

2996 Теорија на агол на чистота

Квантитативни методи кои најчесто се користат во ДЕЛ 07

Стандарден метод на крива, поделен на метод на надворешен стандард и метод на внатрешен стандард:

1. Надворешен стандарден метод: најмногу се користи во течна хроматографија

Беа подготвени низа стандардни примероци со познати концентрации користејќи чисти примероци од соединенијата што треба да се тестираат како стандардни примероци.се инјектира во колоната до нејзината вредност на одговор (област на врв).
Во одреден опсег, постои добра линеарна врска помеѓу концентрацијата на стандардниот примерок и вредноста на одговорот, имено W= f×A , и се прави стандардна крива.

Под точно исти експериментални услови, инјектирајте ја непознатата мостра за да се добие вредноста на одговорот на компонентата што треба да се мери.Според познатиот коефициент f, може да се добие концентрацијата на компонентата што треба да се мери.

Предностите на методот на надворешен стандард:едноставна работа и пресметка, тоа е најчесто користен квантитативен метод;нема потреба секоја компонента да се открие и елуира;потребен е стандарден примерок;условите за мерење на стандардниот примерок и непознатиот примерок треба да бидат конзистентни;волуменот на инјектирање треба да биде прецизен.

Недостатоци на надворешниот стандарден метод:Експерименталните услови се бара да бидат високи, како што се чувствителноста на детекторот, брзината на проток и составот на мобилната фаза не може да се промени;волуменот на секоја инјекција треба да има добра повторливост.

2. Внатрешен стандарден метод: точни, но проблематични, најчесто користени во стандардните методи

Познато количество од внатрешниот стандард се додава во стандардот за да се направи мешан стандард и се подготвуваат серија работни стандарди со позната концентрација.Моларниот однос на стандардот кон внатрешниот стандард во мешаниот стандард останува непроменет.Инјектирајте во хроматографската колона и земете (стандардна површина на врвот на примерокот/внатрешен стандарден пик на примерокот) како вредност на одговорот.Според линеарната врска помеѓу вредноста на одговорот и концентрацијата на работниот стандард, имено W= f×A , се прави стандардна крива.

Познато количество внатрешен стандард се додава на непознатата мостра и се вбризгува во колоната за да се добие вредноста на одговорот на компонентата што треба да се мери.Според познатиот коефициент f, може да се добие концентрацијата на компонентата што треба да се мери.

Карактеристики на методот на внатрешен стандард:За време на операцијата, примерокот и внатрешниот стандард се мешаат заедно и се вбризгуваат во хроматографската колона, така што се додека односот на количината на измерената компонента со внатрешниот стандард во мешаниот раствор е константен, промената на волуменот на примерокот нема да влијае на квантитативните резултати..Методот на внатрешен стандард го неутрализира влијанието на волуменот на примерокот, па дури и на мобилната фаза и детекторот, така што е попрецизен од методот на надворешниот стандард.

ДЕЛ
08 Фактори кои влијаат на резултатите од квантитативната анализа

Лошата точност може да биде предизвикана од:

Неправилна интеграција на површината на врвот, распаѓање на примерокот или нечистотии воведени за време на подготовката на примерокот, вијалата за примерок не е запечатена, испарување на примерокот или растворувачот, неправилна подготовка на примерокот, проблеми со инјектирање на примерокот, неправилна подготовка на внатрешен стандард

Можни причини за слаба прецизност:

Неправилна интеграција на врвот, проблеми со инјектирање или инјектор, распаѓање на примерокот или нечистотии воведени при подготовката на примерокот, хроматографски проблеми, деградиран одговор на детекторот