Мобилната фаза е еквивалентна на течната фаза на крвта, а има различни работи на кои треба да се внимава при употреба. Меѓу нив, има и некои „стапици“ на кои мора да се обрне внимание.
01. Измерете ја pH вредноста на мобилната фаза по додавање на органски растворувач
Ако ја мерите pH вредноста со органски адитив, pH што ќе ја добиете ќе биде различна од пред да го додадете органскиот растворувач. Сепак, најважно е да се биде доследен. Ако секогаш ја мерите pH вредноста по додавањето на органскиот растворувач, погрижете се да ги наведете вашите чекори во методот што го користите, така што другите ќе го следат истиот метод. Овој метод не е 100% точен, но барем ќе го одржи методот конзистентен. Ова може да биде поважно од добивање точна pH вредност.
02. Не се користи бафер
Целта на пуферот е да ја контролира pH вредноста и да спречи нејзино менување. Многу други методи ја менуваат pH вредноста на мобилната фаза, што може да предизвика поместувања во времето на задржување, обликот на врвот и максималниот одговор.
Мравја киселина, TFA итн. не се пуфери
03. Не се користи пуфер во рамките на нормалниот опсег на pH
Секој пуфер има ширина на опсег од 2 pH единици, во рамките на кои обезбедува најдобра pH стабилност. Пуферите надвор од овој прозорец нема да обезбедат ефективна отпорност на промените на pH вредноста. Или користете тампон во правилниот опсег или изберете пуфер што го покрива опсегот на pH што ви треба.
04. Додадете пуфер во органскиот раствор
Мешањето на пуфер раствор со органска фаза најверојатно ќе предизвика таложење на пуферот. Во многу случаи, дури и ако имало врнежи, сè уште е тешко да се открие. Не заборавајте секогаш да го додавате органскиот раствор во водната фаза, што може значително да ја намали можноста за тампон таложење.
05. Со пумпа се меша градиентот на концентрација од 0%.
Пумпите што се достапни денес можат ефективно да ги мешаат мобилните фази и да го дегазираат внатре, но не секој што го користи вашиот метод ќе има пумпа со висок квалитет. Измешајте ги A и B во еден раствор и истурете го 100% внатре.
На пример, 950 ml органска почетна смеса може да се подготви со мешање со 50 ml вода. Предноста на ова е што може да ја намали варијабилноста помеѓу HPLC и да ја намали можноста за меурчиња и врнежи во системот. Вреди да се напомене дека односот на мешавината на пумпата е 95:5, што не значи дека претходно измешаното време на задржување во шишето е исто така 95:5.
06. Некористење на правилната модифицирана киселина (база) за промена на тампонот
Користете ја само киселината или базата што ја формираат пуферната сол што ја користите. На пример, натриум фосфат пуфер треба да се подготви само со фосфорна киселина или натриум хидроксид.
07. Не наведување на сите информации за баферот во методот, како на пример додавање 5 g нанатриум фосфат до 1000 ml вода.
Типот на пуфер го одредува опсегот на pH што може да се пуферира. Потребната концентрација ја одредува јачината на пуферот. 5 грама или безводен натриум фосфат и 5 грама мононатриум фосфат монохидрат имаат различна јачина на пуферот.
08. Додавање органски растворувачи пред проверка
Ако претходниот метод користеше тампон решение за основната линија Б, а вашиот метод користи органско решение за основната линија Б, се надеваме дека може да го решите тампонот во цевката на пумпата и главата на пумпата.
09. Подигнете го шишето и испразнете ја последната капка
Има добри шанси да немате доволно мобилна фаза за да го завршите целото возење и вашиот примерок да пуши. Покрај можноста за изгорување на системот на пумпата и колоната, мобилната фаза целосно ќе испари и мобилната фаза на горниот дел од шишето ќе се промени.
10. Користете мобилна фаза за дегасирање со ултразвук
Најважната точка е да бидете сигурни дека сите пуферски соли се растворени, но ова е најлошиот начин за дегасирање и брзо ќе ја загрее мобилната фаза, предизвикувајќи испарување на органските компоненти. За да заштедите непотребни проблеми подоцна, одвојте пет минути за да ја филтрирате вашата мобилна фаза со правосмукалка.
Време на објавување: 27.08.2024